1.发散合成法
1963年Merrifield首先介绍了固相多肽合成法,该方法简便易行,至今已经发展成为合成多肽、寡核苷酸甚至某些有机小分子的通用方法。发散法合成树状多肽多采用此法,具体的合成步骤与线型多肽相同。通常合成开始于以di-Boc或diFmoc保护的赖氨酸合成二级或三级的分支结构,然后其它多肽序列被一步一步合成到该赖氨酸骨架上。合成结束后,将所得的树状多肽从树脂上切割下来,进行进一步的提纯和表征。
随着赖氨酸级数的增加,分子中发生链间聚集(aggregation)的倾向也逐渐升高。为了减轻这种效应,发散法要求在开始合成时采用较低的树脂负荷(loading),一般是0.1mmol/g树脂,比通常固相法的0.3—0.8mmol/g树脂低得多。而阻碍连接反应的链间氢键的形成也可以通过采用特殊的溶剂组合和提高反应温度来实现。除赖氨酸外,Crespo等人介绍了以顺式4-氨基-L-脯氨酸(Amp)为分支单位的树状多肽。分步发散合成法的一个变体是在赖氨酸骨架上连接不同的肽链,该问题通过使赖氨酸的α和ε氨基端具有不同的保护基而解决,通常分别为Boc和Fmoc。
除固相合成法外 , 传统发散液相多肽合成法也在树状多肽合成中得到应用 。 Rodriguez - Hemández等利用氨基酸 N- 羧基内酸酯 ( N- carboxyan-hydrides , NCAs ) 发生开环聚合反应 , 得到具有多聚赖氨酸长链的树状多肽 , 产率较高 。Baigude等使用 di - Boc 保护的赖氨酸液相合成具有多糖外层的树状多肽 , 作为 AIDS 疫苗。Cho i 等以液相多肽合成法在聚乙二醇( poly( ethylene glycol) , PEG) 高分子两端合成赖氨酸骨架 , 成为哑铃型树状多肽分子 。
发散合成法具有简便迅速 、 可靠性高 、 中间产物不用纯化的优点 。http://www.ontoresinc.com/ 但是在合成较大的多肽时 , 总产率随树状多肽级数的增加呈指数式下降 , 即使每一步反应的产率很高 , 4 —5 级反应后总产率仍然会降到不能接受的程度 。 尤 其是目标分子分子量大于20000 时 , 终产物将很难与有瑕疵的副产物分离, 此时多采用收敛合成法 。
