多肽荧光标记: FITC, FAM, TAMRA, EDANS/Dabcyl...
荧光染料是生物分子标记的重要工具。荧光素衍生物可被广泛地标记在那些用于荧光显微镜、流式细胞仪和免疫荧光检测等领域的试剂上。
对众多应用来说,在化学合成过程中引入荧光标记是很容易的。 如在固相合成过程中,FITC可以与赖氨酸(Lys)或被选择性地脱保护的鸟氨酸(ornithine)侧链,或合成过程中的多肽N端氨基反应。当在N端标记时,建议在最后一个氨基和由异硫氰酸酯与氨基反应产生的硫脲键之间引入烷基间隔器(alkyl spacer),如氨基己酸(Ahx)。
Ahx或b-Ala均可作为linker用于FITC标记的多肽上。
大多数染料都是大型的芳香分子,如此庞大分子的介入有助于避免标签和多肽之间的相互作用。这将有助于保持多肽的构象和生物学活性。一般来说,推荐引入一个柔性间隔如Ahx(一个6碳化合物)会使荧光标记更加稳定。否则FITC将很容易与其他任何位置的半胱氨酸的巯基或赖氨酸的氨基发生连接。
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