蛋白质相互作用(protein interaction)实验方法

免疫共沉淀和亲和层析共分离：

免疫共沉淀是证明蛋白质-蛋白质相互作用的最直接最经典和最有效的方法，如蛋白A能与B相互作用结合成异源二聚体，无论用抗A或抗B的抗体或与A或 B的亲和物偶联的agarose小珠都能把A和B沉淀下来。因此广泛用于蛋白质相互作用研究。

常用的小珠：

GST-Agarose（不需要抗体）

ProteinA-Agarose(用时需加抗体)

基本方法：

1.表达蛋白质A

2.蛋白质A与亲和小珠结合

3.用结合有蛋白质A的亲和小珠调取细胞破碎液中蛋白质B

4.离心、洗涤亲和小珠若干次

5.处理亲和小珠使蛋白质A、B解吸附（可以直接用SDS-PAGE上样BUFFER煮）

酵母双杂交系统

基本原理，以酵母S.cerevisiae的转录因子GAL4系统为例

GAL4有两个结构上互相分开，功能上相互独立的结构域。

N 端1-147aa与DNA结合（DNA binding domain,BD）。

C端768-881aa能激活转录（Activation Domain,AD)。

BD＋AD—能激活GAL4效应基因的上游激活序列（UAS）。

把N和C分开分别构建成两种表达质粒。如把Gal4的N端和诱饵蛋白（研究的目标蛋白A）融合表达，把细胞cDNA和C端融合表达，cDNA编码的蛋白x如能和A互相作用,就能把Gal4N端C端和N端联系在一起，就可以激活UAS下游的基因表达。

半乳糖苷酶（Laz）基因克隆到URA3的下游。

在x-Gal的存在下酵母菌落成蓝色(Fields)

酵母GAL4基因缺失；GAL80基因缺失（GAL4的负调控因子）